HRP标记抗体-简易过碘酸钠法
来源:admin 浏览量: 发布时间:2018-04-28 14:42:47
1、溶液配制:
0.06M NaIO4:称取0.128g NaIO4溶于10mL去离子水中
0.16M乙二醇:取乙二醇9μL,加屈臣氏蒸馏水至1mL,即得。
0.05M CB Buffer:取3.18g Na2CO3,5.88g NaHCO3,溶于2L屈臣氏蒸馏水
4mg/mL NaBH4:称取40mg NaBH4,溶于10mL去离子水中
2、方法步骤:
(1) 称取2mgHRP溶解于0.5ml蒸馏水中,溶液为棕黄色。
(2) 于上液中加入0.4ml新配的0.06M NaIO4溶液,立刻变为灰绿色,4℃避光
搅拌30分钟。
(3) 加入0.16mol/L乙二醇0.4mL,静置30min,溶液缓慢变回棕黄色,RT,
加入抗体1ml 4mg,CB,4℃透析过夜。
(4) 再加入4mg/mL NaIO4 0.1mL,加入后溶液有气泡产生。室温静置2h
(5) 50%饱和硫酸铵盐析一次,12000rpm,4℃离心30min。沉淀用5mL
0.01mol/L PB重悬。
(6) 将上述液装入透析袋中,对0.15M pH7.4 PBS 置4℃冰箱透析过夜,再换用0.01M pH7.4的PBS透析两次。浓缩后加入等量甘油置负20℃保存。
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