抗体纯化方法
来源：admin 浏览量： 发布时间：2018-01-10 16:42:02
1.盐析法（饱和硫酸铵沉淀法）
该纯化方法是基于在待纯化免疫血清中加入饱和硫酸铵溶液，由于抗体也是一种蛋白质，其在水溶液中的溶解度是由其本身携带的亲水基团数和电荷数决定的，当我们向抗血清中加入饱和硫酸铵溶液后，硫酸根离子和铵根离子与抗体竞争溶液中的水分子，因为硫酸根离子和铵根离子与抗体分子相比，具有更强的亲水性，因此抗体分子表面的水化膜被破坏，同时其暴露出来的带电基团被溶液中的盐离子所中和进而导致其溶解度大大降低，依据此原理从而将其从抗血清中分离。
2.正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法
该纯化方法原理是：正辛酸在偏酸条件下，能与抗血清中或者小鼠腹水中的杂蛋白结合，在等电点附近将其沉淀，IgG类抗体则存在于上清液中，再利用饱和硫酸铵沉淀法即可进一步提纯。
3.Protein A和protein G纯化法
基本原理：protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上，当抗血清从中流过时，特异性的IgG就与配基结合，其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同，我们需要具体情况具体对待，分别选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，猪的多克隆抗体用protein A纯化，而小鼠单抗IgG1, 大鼠单抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。
4.免疫亲和纯化法
基本原理：将抗原作为一种配基偶联在sepharose 4B上，血清等生物液体中的特异性抗体与sepharose 4B上的抗原进行特异性结合，其他杂蛋白和杂抗体则不被结合，通过洗涤和洗脱等一系列实验步骤即可得到高纯度的目标抗体。本方法虽然和Protein A/G均被称为亲和纯化方法，但是纯化得到的最终的抗体还是有很大区别的，Protein A/G纯化得到的主要是非特异性的IgG类抗体，而本方法纯化得到的主要是特异性的IgG类抗体，与其他纯化方法相比，本方法纯化得到的抗体其特异性最强，纯度最高。本纯化方法的实验步骤与protein A/G纯化方法基本一致，将实验方法三的配基protein A/G换成相应的目标抗原即可。
该纯化方法是基于在待纯化免疫血清中加入饱和硫酸铵溶液，由于抗体也是一种蛋白质，其在水溶液中的溶解度是由其本身携带的亲水基团数和电荷数决定的，当我们向抗血清中加入饱和硫酸铵溶液后，硫酸根离子和铵根离子与抗体竞争溶液中的水分子，因为硫酸根离子和铵根离子与抗体分子相比，具有更强的亲水性，因此抗体分子表面的水化膜被破坏，同时其暴露出来的带电基团被溶液中的盐离子所中和进而导致其溶解度大大降低，依据此原理从而将其从抗血清中分离。
2.正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法
该纯化方法原理是：正辛酸在偏酸条件下，能与抗血清中或者小鼠腹水中的杂蛋白结合，在等电点附近将其沉淀，IgG类抗体则存在于上清液中，再利用饱和硫酸铵沉淀法即可进一步提纯。
3.Protein A和protein G纯化法
基本原理：protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上，当抗血清从中流过时，特异性的IgG就与配基结合，其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同，我们需要具体情况具体对待，分别选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，猪的多克隆抗体用protein A纯化，而小鼠单抗IgG1, 大鼠单抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。
4.免疫亲和纯化法
基本原理：将抗原作为一种配基偶联在sepharose 4B上，血清等生物液体中的特异性抗体与sepharose 4B上的抗原进行特异性结合，其他杂蛋白和杂抗体则不被结合，通过洗涤和洗脱等一系列实验步骤即可得到高纯度的目标抗体。本方法虽然和Protein A/G均被称为亲和纯化方法，但是纯化得到的最终的抗体还是有很大区别的，Protein A/G纯化得到的主要是非特异性的IgG类抗体，而本方法纯化得到的主要是特异性的IgG类抗体，与其他纯化方法相比，本方法纯化得到的抗体其特异性最强，纯度最高。本纯化方法的实验步骤与protein A/G纯化方法基本一致，将实验方法三的配基protein A/G换成相应的目标抗原即可。
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