克隆载体与表达载体的区别
来源：admin 浏览量： 发布时间：2018-01-10 16:45:05
克隆载体与表达载体从本质来说都是人工构建的、独立于染色体之外的环形DNA序列，通常都具有质粒复制起始位点、筛选标记，限制性酶切位点或克隆位点等遗传元件。但是，由于克隆载体与表达载体的使用目的不同，作用不同，因此在结构上也有一些区别。
使用克隆载体的目的在于复制足够多的目的质粒，以获取足够多的目的DNA片段。将需要克隆的目的基因与克隆载体的多克隆位点连接，导入大肠杆菌内，质粒会在细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定会被大量复制。因此克隆载体常携带有较强的自我复制元件，如复制起始位点等，在宿主菌体内的拷贝数较高，在质粒提取时也容易抽提到大量的质粒。但克隆载体不具备表达调控元件。
使用表达载体的目的是利用表达载体克隆外源基因，并在宿主菌中进行外源目的基因的表达，因此相对于克隆载体，表达载体的结构更为复杂，通常会在克隆载体基本骨架的基础上再增加表达调控元件，如启动子（T7）、调节子（LacZ）、核糖体结合位点（RBS）、终止子等，其目的是为了调控目标蛋白的表达。为了保证重组质粒和重组菌株的稳定性，通常表达载体的拷贝数都没有克隆载体高，如以pET为代表的表达载体在大肠杆菌内的拷贝数就比较低。
同时，表达载体还具有如下特点：
（1）多克隆位点位于启动子下游，以使克隆的外源基因得以表达；
（2）具有很强的启动子（Promoter），能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别；
（3）具有抑制子（Repressor），使启动子受到控制。平常条件下启动子被抑制，目的蛋白不表达，只有当诱导时（如加入IPTG作为诱导剂）才能启动转录表达；
（4）具有很强的终止子，以使RNA聚合酶更多的转录克隆的外源基因，而不转录其它无关的基因；
（5）转录产生的mRNA必须具有翻译的起始信号，即SD序列和起始密码AUG等，以便转录后能顺利翻译。
使用克隆载体的目的在于复制足够多的目的质粒，以获取足够多的目的DNA片段。将需要克隆的目的基因与克隆载体的多克隆位点连接，导入大肠杆菌内，质粒会在细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定会被大量复制。因此克隆载体常携带有较强的自我复制元件，如复制起始位点等，在宿主菌体内的拷贝数较高，在质粒提取时也容易抽提到大量的质粒。但克隆载体不具备表达调控元件。
使用表达载体的目的是利用表达载体克隆外源基因，并在宿主菌中进行外源目的基因的表达，因此相对于克隆载体，表达载体的结构更为复杂，通常会在克隆载体基本骨架的基础上再增加表达调控元件，如启动子（T7）、调节子（LacZ）、核糖体结合位点（RBS）、终止子等，其目的是为了调控目标蛋白的表达。为了保证重组质粒和重组菌株的稳定性，通常表达载体的拷贝数都没有克隆载体高，如以pET为代表的表达载体在大肠杆菌内的拷贝数就比较低。
同时，表达载体还具有如下特点：
（1）多克隆位点位于启动子下游，以使克隆的外源基因得以表达；
（2）具有很强的启动子（Promoter），能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别；
（3）具有抑制子（Repressor），使启动子受到控制。平常条件下启动子被抑制，目的蛋白不表达，只有当诱导时（如加入IPTG作为诱导剂）才能启动转录表达；
（4）具有很强的终止子，以使RNA聚合酶更多的转录克隆的外源基因，而不转录其它无关的基因；
（5）转录产生的mRNA必须具有翻译的起始信号，即SD序列和起始密码AUG等，以便转录后能顺利翻译。
