多肽的纯度(HPLC)及多肽含量(Peptide Content)
来源:admin 浏览量: 发布时间:2018-04-28 15:08:38
多肽的纯度(HPLC)及多肽含量(Peptide Content)意义不同,订购多肽之前需要明确。
案例:1g 多肽 HPLC 98% 纯度, 80% 多肽含量,水含量10%,TFA含量10%
称重:1g
多肽部分:800mg 【其中784mg 是目的多肽(多肽部分的 98%),16mg 是其他肽杂质 (多肽部分的 2%)】
水部分:100mg
盐部分: TFA 100mg
一般订购多肽纯度指标,指的是HPLC纯度。
具体解释:
多肽的纯度是指HPLC方法在220nm处检测到的目标多肽的含量(220nm是肽链的吸收波长),紫外分光光度计检测不到水和残留的盐。但可发现其他的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列),截断序列(加帽过程中产生的序列)脱保护不完全序列(产生于整个合成过程或最后的裂解过程)。
多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA(三氟乙酸),如:游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质。通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。即使处于冻干状态,水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。
纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了TFA盐,大多数为序列被修改的多肽。
1. 缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列
2. 为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作,截断序列即产生于加帽过程中
3. 产生于整个合成过程或最后的裂解过程
4. 保护基重新附着在多肽的其他位置
如果对盐有特殊要求,请在询价时,明确一下(脱盐,转成醋酸盐 等)。如果不注明,做成的多肽都是TFA(三氟乙酸)盐形式。
注意,武汉百意欣生物技术有限公司使用的HPLC 测试体系如下:
Solvent A: 0.1%Trifluoroacetic in 100% Acetonirile
Solvent B: 0.1%Trifluoroacetic in 100% Water
Flow rate:1.0ml/min
Wavelength:220nm
色谱柱:C18 反相柱
如果您有特殊的分析条件(色谱条件),请在订购之前告知,我们将和商讨。如果您没有特殊要求,我们的测试条件就是上述常用的体系。
多肽含量(Peptide Content)是指与非肽物质(主要为抗衡离子和水)相比的多肽量。可通过氨基酸分析来确定肽净含量。如果您需要这项服务请在订单上明确。通常,亲水性多肽即使在严格的冻干状态下,也会吸收微量的水。因纯化和冻干工艺,会导致不同批次的肽净含量有所不同。